معلومة مفيدة وجديدة✨
🔹تقنية الاستنساخ الجزيئي الجيني DNA Molecular cloning
من التقنيات شائعة الاستخدام في مجال الأحياء الجزيئية وتطبيقاتها حيث تسمح بنقل الصفات الوراثية من كائن إلى آخر عن طريق مضاعفة الجزء المرغوب من الحمض النووي ونقله باستخدام(DNA)بلازميد
#معلومه_جديده_مفيده
🔹تقنية الاستنساخ الجزيئي الجيني DNA Molecular cloning
من التقنيات شائعة الاستخدام في مجال الأحياء الجزيئية وتطبيقاتها حيث تسمح بنقل الصفات الوراثية من كائن إلى آخر عن طريق مضاعفة الجزء المرغوب من الحمض النووي ونقله باستخدام(DNA)بلازميد
#معلومه_جديده_مفيده
🔹ماهو DNA بلازميد؟
- تستخدم هذه التقنية غالبا كخطوة أولى للعديد من التطبيقات الجزيئية في معامل الأبحاث، حيث تخدم في تحضير حجر الأساس للبدء في صناعة البروتينات، وعمل الطفرات الجينية، وتحديد الصفات الوراثية، ومعرفة التسلسل الجيني، وغيرها من التطبيقات الجزيئية الأخرى
- تستخدم هذه التقنية غالبا كخطوة أولى للعديد من التطبيقات الجزيئية في معامل الأبحاث، حيث تخدم في تحضير حجر الأساس للبدء في صناعة البروتينات، وعمل الطفرات الجينية، وتحديد الصفات الوراثية، ومعرفة التسلسل الجيني، وغيرها من التطبيقات الجزيئية الأخرى
- تتضمن التقنية التقليدية لاستنساخ الجينات نقل جزء من الحمض النووي المطلوب من كائن حي إلى آخر باستخدام بلازميد بكتيري (Bacterial DNA plasmid)
🔹ماهو الفرق بين تقنية مضاعفة الحمض النووي PCR والاستنساخ الجيني Gene cloning؟
تخدم هذه التقنيات في عمل نسخ من الجين المطلوب دراسته والفرق بينهما إما خارج الخلايا كما هو الحال في (PCR) (In Vitro)
تخدم هذه التقنيات في عمل نسخ من الجين المطلوب دراسته والفرق بينهما إما خارج الخلايا كما هو الحال في (PCR) (In Vitro)
أو داخل الخلايا الحية كما في الاستنساخ الجيني ( In Vivo) وتتطلب التقنية الأخيرة استخدام تقنية PCR للبدء في عمل النسخ الجينية للجين المراد نقله إلى كائن اخر
🔹ما هي طريقة عمل تقنية الاستنساخ الجيني؟
بداية يتم تصميم Primers متخصصة في مضاعفة الجين المنقول بمواصفات معينة تتضمن وجود مناطق للقص (restriction sites) وذلك للاستفادة منها في عملية إلتحام الجزء المنسوخ مع البلازميد البكتيري
بداية يتم تصميم Primers متخصصة في مضاعفة الجين المنقول بمواصفات معينة تتضمن وجود مناطق للقص (restriction sites) وذلك للاستفادة منها في عملية إلتحام الجزء المنسوخ مع البلازميد البكتيري
عند تصميم Primers يؤخذ في الحسبان مناطق القص باستخدام الإنزيمات (restriction enzymes) والتي تلعب دورا هاما حيث تستخدم نفس الانزيمات القاطعة في كلا من "الجين المراد نقله" والبلازميد البكتيري
وذلك لخلق مواقع متشابهة في الطرفين (الطرف الاول: الجين المنقول، الطرف الثاني: البلازميد البكتيري) تمهيدا لعملية الإلتحام (ligation) في الخطوات اللاحقة👍🏻✨
🔸ملاحظة: يتم عمل القص لكل من الطرفين في أنبوب اختبار منفصل
🔸يتم تجهيز الطرف الأول باستخدام PCR لتكوين نسخ متعددة من الجين المنقول يليه عملية القص بالإنزيمات القاطعه (يكون القطع من الاطراف)
🔸يتم تجهيز الطرف الأول باستخدام PCR لتكوين نسخ متعددة من الجين المنقول يليه عملية القص بالإنزيمات القاطعه (يكون القطع من الاطراف)
🔸يتم تجهيز الطرف الثاني بإخراج البلازميد البكتيري (DNA plasmid extraction) من البكتيريا الحامله واستخدام نفس الانزيمات المستخدمة في الطرف الاول (ملحوظه: البلازميد عبارة عن قطعه دائريه يتم فتحها الى قطعه مستقيمة بعد عملية القص)
🔸بعد تجهيز الطرفين في أنابيب منفصلة، يتم إضافة الطرفين في أنبوب واحد تمهيدا لعملية الإلتحام (Ligation) وتكون نسبة الإضافه ٣:١ بمعنى كل ٣ نسخ من الطرف الأول يقابلها نسخة واحدة من الطرف الثاني
🔸تتم خطوة الإلتحام بين الطرفين باستخدام الإنزيم اللاصق (Ligase) ، بحيث تلتصق المناطق المتشابهة بين الطرفين مع بعضها ويعنى بذلك مناطق القطع حسب الإنزيم المستخدم
🔸بعد عملية الإلتحام، يتكون لدينا بلازميد بكتيري يتضمن الجزء المنقول (الطرف الأول) ويمكن التأكد من نجاح هذه الخطوة بعمل DNA electrophoresis وقياس حجم البلازميد بعد الاضافه (حجم البلازميد+حجم الجين المنقول = حجم البلازميد الجديد recombinant DNA plasmid)
🔸بعد التأكد من نجاح هذه الخطوة، يتم نقل البلازميد الجديد إلى خلية بكتيرية باستخدام تقنية Bacterial transformation وغالبا تستخدم فيه بكتيريا E.coli المجهزة لهذا الغرض👍🏻✨
(الهدف من هذه الخطوة هو عمل نسخ كثيرة من البلازميد الجديد داخل الخلية الحية وبالتالي تكتسب E.coli بعض الصفات الجديدة حسب نوع البروتينات الجديدة المكتسبة من الطرف الأول)
🔷واخيرا✨
يتم التأكد من نجاح هذه الخطوه بزرع E.coli على Media تحتوي على تركيزات معينة من المضاد الحيوي (حسب نوع البلازميد)
- يسمى البلازميد الجديد Clone
- تسمى الخلية البكتيرية Mutant وايضا الخلايا المنسوخة Cloned cell
يتم التأكد من نجاح هذه الخطوه بزرع E.coli على Media تحتوي على تركيزات معينة من المضاد الحيوي (حسب نوع البلازميد)
- يسمى البلازميد الجديد Clone
- تسمى الخلية البكتيرية Mutant وايضا الخلايا المنسوخة Cloned cell
جاري تحميل الاقتراحات...