سلسلة تغريدات عن تقنية Southern Blot مع مقاطع من المختبر تشرحها بالتفصيل. سيكون التطبيق على kit من شركة Abnova.
لماذا سميت بهذا الاسم؟
سميت هذه التقنية على اسم مخترعها إدوارد ساوثرن.
ما فائدة هذه التقنية؟
هي تقوم بالكشف عن جزء من الحمض النووي DNA الموجود في العينة.
سميت هذه التقنية على اسم مخترعها إدوارد ساوثرن.
ما فائدة هذه التقنية؟
هي تقوم بالكشف عن جزء من الحمض النووي DNA الموجود في العينة.
الخطوات باختصار هي :
الخطوة 1 نعمل digestion للحمض النووي بواسطة الانزيم "الفصل"
الخطوة 2استخدام الجل.
الخطوة 3 التنشيف.
الخطوة 4 استخدام الـ probe لالتصاق .
الخطوة 5 Hybridization والغسيل.
الخطوة 6 الكشف.
الخطوة 1 نعمل digestion للحمض النووي بواسطة الانزيم "الفصل"
الخطوة 2استخدام الجل.
الخطوة 3 التنشيف.
الخطوة 4 استخدام الـ probe لالتصاق .
الخطوة 5 Hybridization والغسيل.
الخطوة 6 الكشف.
- بداية وضع العينات في الـgel بعد استخدام انزيم Restriction enzyme
- تشغيل الجل
- بعد الانتهاء يتم اضافة محلول Buffer Denaturation ثم وضعه في جهاز هزاز لمدة ٣٠ دقيقة
"الهدف اننا نفصل الحمض النووي ونحوله من double الى single"
- تشغيل الجل
- بعد الانتهاء يتم اضافة محلول Buffer Denaturation ثم وضعه في جهاز هزاز لمدة ٣٠ دقيقة
"الهدف اننا نفصل الحمض النووي ونحوله من double الى single"
- يتم اضافة محلول Neutralization مع وضعه على الاهتزاز لمدة ٣٠ دقيقة لازالة محلول Buffer Denaturation
- الان يتم وضع ورقة المرشح "فلتر" Whatman 3MM
- يتم اضافة محلول (buffer (10xSSC ليتم تنقيع المرشح بالمحلول
- الان يتم وضع ورقة المرشح "فلتر" Whatman 3MM
- يتم اضافة محلول (buffer (10xSSC ليتم تنقيع المرشح بالمحلول
- اضافة اثنين من sheets مبللة
- ازالة اي فقاعات ثم وضع الجل عليه
- بعدها يتم وضع غشاء nylon على الجل
- اضافة محلول Buffer transfer
- اضافة اثنين من sheets whatman 3MM
- ازالة اي فقاعات وتغطيته بالبلاستيك
- اضافة اوراق منشفه عليه
- اضافة قطعة زجاجية ثم ثقل وزني
- تركه ليوم كامل
- ازالة اي فقاعات ثم وضع الجل عليه
- بعدها يتم وضع غشاء nylon على الجل
- اضافة محلول Buffer transfer
- اضافة اثنين من sheets whatman 3MM
- ازالة اي فقاعات وتغطيته بالبلاستيك
- اضافة اوراق منشفه عليه
- اضافة قطعة زجاجية ثم ثقل وزني
- تركه ليوم كامل
-اخذ الغشاء nylon ويتم وضع محلول x6 SSC عليه
- يتم وضع الغشاء في UV لمدة ١٢ دقيقة
- الان وصلنا الى مرحلة Hybridization لذلك سنضع الغشاء في محلول Buffer Prehybridization
- ثم يتم وضعه لمدة تتراوح بين ٢-٤ ساعات في الحضّانة على درجة حرارة ٤٢ درجة مئوية.
- يتم وضع الغشاء في UV لمدة ١٢ دقيقة
- الان وصلنا الى مرحلة Hybridization لذلك سنضع الغشاء في محلول Buffer Prehybridization
- ثم يتم وضعه لمدة تتراوح بين ٢-٤ ساعات في الحضّانة على درجة حرارة ٤٢ درجة مئوية.
الان مرحلة Hybridization و هنا سنقوم بالربط بين single DNA مع الـ probe ليصبح double لذلك:
- نضيف محلول Hybridization buffer
- نضيف probe ونتركه لمدة يوم
- بعد ذلك ازالة السائل
- نغسل الغشاء بمحلول غسيل Buffer
- نضعه في الحضّانة لمدة ٣٠ دقيقة على درجة حرارة ٥٢ لثلاث مرات.
- نضيف محلول Hybridization buffer
- نضيف probe ونتركه لمدة يوم
- بعد ذلك ازالة السائل
- نغسل الغشاء بمحلول غسيل Buffer
- نضعه في الحضّانة لمدة ٣٠ دقيقة على درجة حرارة ٥٢ لثلاث مرات.
الان ماهو الفرق بين تقنية Southern Blot و PCR ؟
من ابرز الفروقات:
-في الـ PCR سنحتاج الى بادئ Primer بينما لانحتاج إليه في التقنية الاولى.
- الوقت المستهلك في Southern Blot اكبر من الـ PCR
- عينة الحمض النووي يجب ان تكون نقاوتها عالية في Southern Blot وهي اعلى من عينة PCR.
من ابرز الفروقات:
-في الـ PCR سنحتاج الى بادئ Primer بينما لانحتاج إليه في التقنية الاولى.
- الوقت المستهلك في Southern Blot اكبر من الـ PCR
- عينة الحمض النووي يجب ان تكون نقاوتها عالية في Southern Blot وهي اعلى من عينة PCR.
ماهي استخدامات Southern Blot؟
- الكشف على الطفرات الموجودة في الحمض النووي لبعض الامراض
- الكشف عن مسببات بعض الامراض الفايروسية والبكتيرية عن طريق جزء من الحمض النووي لتلك المسببات
- التعرف على التباين في بعض الجينات
- التعرف على التشابه بين الجينات بين الكائنات المختلفة.
- الكشف على الطفرات الموجودة في الحمض النووي لبعض الامراض
- الكشف عن مسببات بعض الامراض الفايروسية والبكتيرية عن طريق جزء من الحمض النووي لتلك المسببات
- التعرف على التباين في بعض الجينات
- التعرف على التشابه بين الجينات بين الكائنات المختلفة.
جاري تحميل الاقتراحات...