سلسلة تغريدات تتحدث عن المشاكل والحلول الممكنة لتقنية
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
“ELISA” الاليزا.
اثناء عملك عليها وعدم حصولك على النتائج المطلوبة.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
“ELISA” الاليزا.
اثناء عملك عليها وعدم حصولك على النتائج المطلوبة.
المشكلة الاولى:
عدم وجود اشارة او اشارة ضعيفة للعينات
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
الكواشف ليست في درجة حرارة الغرفة في بداية الفحص
الحل:
ضع جميع الكواشف في درجة حرارة الغرفة قبل بدء الفحص. اسمح للكواشف بأن تكون في الخارج لمدة 15-20 دقيقة للوصول إلى درجة حرارة الغرفة
عدم وجود اشارة او اشارة ضعيفة للعينات
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
الكواشف ليست في درجة حرارة الغرفة في بداية الفحص
الحل:
ضع جميع الكواشف في درجة حرارة الغرفة قبل بدء الفحص. اسمح للكواشف بأن تكون في الخارج لمدة 15-20 دقيقة للوصول إلى درجة حرارة الغرفة
إحتمال (٢):
التخزين الغير صحيح او انتهاء الصلاحية للكواشف او Kit
الحل:
-تحقق مرة أخرى من شروط التخزين على ملصق المجموعة Kit . يجب تخزين معظم المجموعات عند 2-8 درجة مئوية.
-قم بالتأكد من تواريخ انتهاء الصلاحية على جميع الكواشف.
التخزين الغير صحيح او انتهاء الصلاحية للكواشف او Kit
الحل:
-تحقق مرة أخرى من شروط التخزين على ملصق المجموعة Kit . يجب تخزين معظم المجموعات عند 2-8 درجة مئوية.
-قم بالتأكد من تواريخ انتهاء الصلاحية على جميع الكواشف.
إحتمال (٣):
الكواشف المضافة او التي تم اعدادها كانت بشكل غير صحيح كالتي تحتاج الى تخفيف
الحل:
-تحقق من البروتوكول، وتأكد من إضافة الكواشف بالترتيب الصحيح وإعداد المحاليل التي يتم تخفيفها بالشكل الصحيح
-تحقق من pipette"الماصة"انها تعمل بالشكل الصحيح،وقم بمراجعة الحسابات
الكواشف المضافة او التي تم اعدادها كانت بشكل غير صحيح كالتي تحتاج الى تخفيف
الحل:
-تحقق من البروتوكول، وتأكد من إضافة الكواشف بالترتيب الصحيح وإعداد المحاليل التي يتم تخفيفها بالشكل الصحيح
-تحقق من pipette"الماصة"انها تعمل بالشكل الصحيح،وقم بمراجعة الحسابات
إحتمال (٤):
لا يلتصق الجسم المضاد باللوح plate
الحل:
-اذا لم تكن تستخدم الالواح التي تأتي مع الـkit تأكد من انها ليست تلك التي تستخدم في زراعة الانسجة او الخلايا
-تأكد من التحضير بالشكل الصحيح، ووقت الحضانة، ايضا خطوات Coating و blocking
لا يلتصق الجسم المضاد باللوح plate
الحل:
-اذا لم تكن تستخدم الالواح التي تأتي مع الـkit تأكد من انها ليست تلك التي تستخدم في زراعة الانسجة او الخلايا
-تأكد من التحضير بالشكل الصحيح، ووقت الحضانة، ايضا خطوات Coating و blocking
إحتمال (٥):
لا يوجد ما يكفي من الأجسام المضادة الكاشفة المستخدمة
الحل:
تأكد من اتباع التخفيفات الموصى بها من الأجسام المضادة
إحتمال (٦):
خدش اللوح plate بالماصة أو tips
الحل:
قد تحتاج غسّالة الألواح الآلية إلى المعايرة حتى لا تلمس قاع الفتحة(في حالة كنت تستخدم غسل آلي وليس يدوي)
لا يوجد ما يكفي من الأجسام المضادة الكاشفة المستخدمة
الحل:
تأكد من اتباع التخفيفات الموصى بها من الأجسام المضادة
إحتمال (٦):
خدش اللوح plate بالماصة أو tips
الحل:
قد تحتاج غسّالة الألواح الآلية إلى المعايرة حتى لا تلمس قاع الفتحة(في حالة كنت تستخدم غسل آلي وليس يدوي)
المشكلة الثانية:
عكس الاولى وهي وجود الكثير من الاشارات
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
الغسيل كان غير كافٍ
الحل:
تأكد من اجراءات الغسيل المناسبة.واقلب اللوح واتركه يصفى تمامًا، واضغط بقوة إذا لزم الأمر لإزالة أي سوائل متبقية
عكس الاولى وهي وجود الكثير من الاشارات
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
الغسيل كان غير كافٍ
الحل:
تأكد من اجراءات الغسيل المناسبة.واقلب اللوح واتركه يصفى تمامًا، واضغط بقوة إذا لزم الأمر لإزالة أي سوائل متبقية
إحتمال (٢):
لم تستخدم غطاء الألواح أو معاد استخدامها
الحل:
-أثناء التحضين، قم بتغطية لوحات الفحص باستخدام غطاء الالواح.
-استخدم غطاء لوحي جديد في كل مرة يتم فيها فتح اللوح. هذا سيمنع الفتحات من تلويث بعضها البعض.
لم تستخدم غطاء الألواح أو معاد استخدامها
الحل:
-أثناء التحضين، قم بتغطية لوحات الفحص باستخدام غطاء الالواح.
-استخدم غطاء لوحي جديد في كل مرة يتم فيها فتح اللوح. هذا سيمنع الفتحات من تلويث بعضها البعض.
إحتمال (٣):
-تم اعداد تخفيفات غير صحيحة
-كانت فترة التحضين اكثر من ماهو موصى به
الحل:
-التأكد من الماصة انها تعمل بالشكل الصحيح، مع التأكد مرة اخرى من الحسابات التي قمت بها.
-الرجوع الى البروتوكول للتأكد من الوقت
-تم اعداد تخفيفات غير صحيحة
-كانت فترة التحضين اكثر من ماهو موصى به
الحل:
-التأكد من الماصة انها تعمل بالشكل الصحيح، مع التأكد مرة اخرى من الحسابات التي قمت بها.
-الرجوع الى البروتوكول للتأكد من الوقت
المشكلة الثالثة:
وجود High background في الاليزا
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
الغسيل كان غير كافٍ
الحل:
استخدم إجراء الغسيل المناسب. اضف ٣٠ ثانية في نهاية كل خطوة غسيل للسماح بمحلول الغسيل ان ينقع.و اقلب اللوح واتركه يصفى تمامًا، واضغط بقوة إذا لزم الأمر لإزالة أي سوائل متبقية.
وجود High background في الاليزا
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
الغسيل كان غير كافٍ
الحل:
استخدم إجراء الغسيل المناسب. اضف ٣٠ ثانية في نهاية كل خطوة غسيل للسماح بمحلول الغسيل ان ينقع.و اقلب اللوح واتركه يصفى تمامًا، واضغط بقوة إذا لزم الأمر لإزالة أي سوائل متبقية.
إحتمال (٢):
محلول Substrate تعرض للضوء قبل الاستخدام
الحل:
قم بتخزينه في مكان مظلم (اذا كان التعرض قليل سيعمل معك).
احتمال (٣):
مثل احتمال رقم (٣) في المشكلة الثانية
محلول Substrate تعرض للضوء قبل الاستخدام
الحل:
قم بتخزينه في مكان مظلم (اذا كان التعرض قليل سيعمل معك).
احتمال (٣):
مثل احتمال رقم (٣) في المشكلة الثانية
المشكلة الرابعة:
تأثير الفتحات التي في الحافة (كما في الصورة) وهي مشكلة شائعة تحدث عندما تكون النتائج التي في فتحات الاطراف اعلى من التي تليها او في المنتصف.
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
-درجة الحرارة كانت متفاوتة
-حدوث تبخر لبعض الفتحات
تأثير الفتحات التي في الحافة (كما في الصورة) وهي مشكلة شائعة تحدث عندما تكون النتائج التي في فتحات الاطراف اعلى من التي تليها او في المنتصف.
الاسباب المحتملة:
إحتمال (١):
-درجة الحرارة كانت متفاوتة
-حدوث تبخر لبعض الفتحات
الحل:
أغلق غطاء اللوح بالكامل باستخدام غطاء مانع للتسرب أثناء فترة الحضّانة. في حالة كانت درجة الحضّانة ٣٧ درجة مئوية، تأكد من ان اللوح في وسط الحضّانة.
إحتمال (٢):
تكدس الالواح فوق بعض
الحل:
لاتقم بتكديسها كما في الصورة اثناء فترة التحضّين.
أغلق غطاء اللوح بالكامل باستخدام غطاء مانع للتسرب أثناء فترة الحضّانة. في حالة كانت درجة الحضّانة ٣٧ درجة مئوية، تأكد من ان اللوح في وسط الحضّانة.
إحتمال (٢):
تكدس الالواح فوق بعض
الحل:
لاتقم بتكديسها كما في الصورة اثناء فترة التحضّين.
جاري تحميل الاقتراحات...