سلسلة تغريدات:
تتحدث عن Nested PCR. مالفرق بينها وبين Standard PCR ؟
تتحدث عن Nested PCR. مالفرق بينها وبين Standard PCR ؟
بداية الفكرة من هذه التقنية هي زيادة حساسية اختبار الـPCR وزيادة فرصة الارتباط النوعي للحمض النووي. وهذا يتطلب وجود اثنين بادئ Primers وبالتأكيد سنقوم بادخال العينات على مرحلتين لكل بادئ مرة.
فكما في الصورة، في المرحلة الاولى تم التحديد من بداية outer primer من بعد اللون الازرق. في المرحلة الثانية كان التحديد يبدأ من بعد outer primer أي تم تحديد الهدف المطلوب عند اللون الاسود بالكامل.
والعملية اشبه ماتكون بـ استخلاص الالماس، فاذا كنت تستخلصه من مرحلة واحدة فقط. قد يشكل عليك اذا كان فعلًا هو الماس ام حجر عادي. لكن اذا كان على مرحلتين مثلًا تكون فرصة التأكد منه أعلى.
فاصل:
يقول يقول النبي ﷺ "صنائع المعروف، تقي مصارع السوء"
طفل يعاني من انسداد في الصمام الثلاثي وضمور بالبطين الأيمن، بحاجة إلى إجراء عملية قلب مفتوح عاجلة تقيه من توقّف النبض لا قدّر الله.
رابط التبرع بما تجود به نفسك:
Ehsan.sa
يقول يقول النبي ﷺ "صنائع المعروف، تقي مصارع السوء"
طفل يعاني من انسداد في الصمام الثلاثي وضمور بالبطين الأيمن، بحاجة إلى إجراء عملية قلب مفتوح عاجلة تقيه من توقّف النبض لا قدّر الله.
رابط التبرع بما تجود به نفسك:
Ehsan.sa
الان ماذا سنفعل لكي نقوم بهذه التقنية؟
في المرحلة الاولى:
-العينة
-الـ kit الذي يحوي mr mix والمحاليل الاخرى
-البادئ الاول primer
-جهاز الـ PCR
المرحلة الثانية:
-العينة، لكن سنقوم بتخفيفها كيف ذلك؟
سيكون التخفيف 10x كيف ذلك؟
١ ul من العينة يضاف به ١٠ ul من H2O
في المرحلة الاولى:
-العينة
-الـ kit الذي يحوي mr mix والمحاليل الاخرى
-البادئ الاول primer
-جهاز الـ PCR
المرحلة الثانية:
-العينة، لكن سنقوم بتخفيفها كيف ذلك؟
سيكون التخفيف 10x كيف ذلك؟
١ ul من العينة يضاف به ١٠ ul من H2O
لكن هنا يُفضل ان تكون الكمية ٤ ul مثلا من العينة والتخفيف يكون ٤٠ ul لماذا؟
لان الكمية الضئيلة قد لاترى او لا تضاف بالشكل الصحيح في الانبوب.
*هذه المعلومة ليست قاعدة تستطيع اخذ الكمية كما تراه مناسب. الاصل ان يكون هناك تخفيف فقط.
الان ستكون العينة من الجزء الذي قمنا بتخفيفه
لان الكمية الضئيلة قد لاترى او لا تضاف بالشكل الصحيح في الانبوب.
*هذه المعلومة ليست قاعدة تستطيع اخذ الكمية كما تراه مناسب. الاصل ان يكون هناك تخفيف فقط.
الان ستكون العينة من الجزء الذي قمنا بتخفيفه
-الـ kit الذي يحوي mr mix والمحاليل الاخرى
-البادئ الثاني primer
-جهاز الـ PCR
* في المرحلة الاولى كما تدخل اي عينات لـ Standard PCR. الاختلاف يكون في المرحلة الثانية.
-البادئ الثاني primer
-جهاز الـ PCR
* في المرحلة الاولى كما تدخل اي عينات لـ Standard PCR. الاختلاف يكون في المرحلة الثانية.
جاري تحميل الاقتراحات...