كيف نستخرج ال 🧬DNA ؟
وايش الخطوات والمواد المستخدمه👏🏻؟
🔵بالبداية فيه اكثر من طريقة سواء كانت manual او شغل جهاز .. لكن يضل الأساس والفكرة وحدة مهما تغيرت اسماء المواد او الطريقة ...
وايش الخطوات والمواد المستخدمه👏🏻؟
🔵بالبداية فيه اكثر من طريقة سواء كانت manual او شغل جهاز .. لكن يضل الأساس والفكرة وحدة مهما تغيرت اسماء المواد او الطريقة ...
بدايةً الDNA اقدر استخرجه من عينات كثير مثل : الشعر واللعاب من النبات والحيوان .. لكن اسهل شيء استخراجه من الدم والي هو الموضوع 🌟..
طبعاً العينه بتكون عندنا blood بتيوب الEDTA طيب ليش EDTA؟ 👇🏻
لان الEDTA تعمل على ازاله عنصرين الي هم الماغنيسيوم Mg -والكالسيومCa📌
لان الEDTA تعمل على ازاله عنصرين الي هم الماغنيسيوم Mg -والكالسيومCa📌
الماغنيسوم:اذا توقف راح يتوقف معاه عمل انزيمDNAseالي وظيفته يكسر لي الDNA
وانا عشان احصل على DNAصالح للاستخدام لازم مايكون فيه تكسر بالتالي مهم عندي يتوقف عمل الDNAasالي ماراح يتوقف الا اذا شلنا الماغنيسيوم 🩸
وانا عشان احصل على DNAصالح للاستخدام لازم مايكون فيه تكسر بالتالي مهم عندي يتوقف عمل الDNAasالي ماراح يتوقف الا اذا شلنا الماغنيسيوم 🩸
والكالسيوم:مهم في عمليه التخثر ,فعشان انا احتاج عينه خاليه من التخثر لازم اشيل الكالسيوم 👏🏻
الخطوه الاولى : lysis 🔵
بالخطوة هذه من اسمها نعرف ان هدفنا تكسير ..
طبعاً زي ما نعرف ال DNA موجود داخل النواه بالخلية ف عشان اوصله احتاج اكسر جدار الخليه نفسها بالبداية عشان اقدر اوصله
بالخطوة هذه من اسمها نعرف ان هدفنا تكسير ..
طبعاً زي ما نعرف ال DNA موجود داخل النواه بالخلية ف عشان اوصله احتاج اكسر جدار الخليه نفسها بالبداية عشان اقدر اوصله
طيب ايش استخدم؟
انزيم ال protinase K 🌟
وهو ببساطه راح يكسر كل البروتينات الي ماسكه بال DNA وايضاً البروتينات الي موجوده بالخلايا ، طيب ليش اكسرها؟ عشان تروح ويبقى لي DNA نقي مو ماسك فيه اي شيء
انزيم ال protinase K 🌟
وهو ببساطه راح يكسر كل البروتينات الي ماسكه بال DNA وايضاً البروتينات الي موجوده بالخلايا ، طيب ليش اكسرها؟ عشان تروح ويبقى لي DNA نقي مو ماسك فيه اي شيء
الخطوة الثانيه : binding 🔵
بأستخدام 96-100% ethanol
الDNA من خصائصه انه hydrophilic (محب للماء ) يعني يذوب بالماء لكن ما يذوب بال ethanol
ف هذه الخطوة هدفها فقط اني اذوب كل المواد الموجوده لأنها تذوب بالايثانول
ويبقى عندي فقط الDNA لانه مايذوب فيه
بأستخدام 96-100% ethanol
الDNA من خصائصه انه hydrophilic (محب للماء ) يعني يذوب بالماء لكن ما يذوب بال ethanol
ف هذه الخطوة هدفها فقط اني اذوب كل المواد الموجوده لأنها تذوب بالايثانول
ويبقى عندي فقط الDNA لانه مايذوب فيه
الخطوة الثالثه : frist wash 🔵
وبكل بساطه هدفها تغسل اي waste موجودة من الخطوات السابقة بحيث اني احصل على DNA نقي
وبكل بساطه هدفها تغسل اي waste موجودة من الخطوات السابقة بحيث اني احصل على DNA نقي
الخطوه الرابعه :second wash 🔵
وهنا نزيد السنترة لاقوى سرعه توصل ل 13 الف 💫
والسبب عشان ابخر الethanol الي ماسك بال DNA
عشان يقدر يوصل للماء ويتم غسله مرة ثانيه
هذه الخطوة تساعد الخطوة الي بعدها انه يتم ترسيب عدد اكبر من ال DNA
وهنا نزيد السنترة لاقوى سرعه توصل ل 13 الف 💫
والسبب عشان ابخر الethanol الي ماسك بال DNA
عشان يقدر يوصل للماء ويتم غسله مرة ثانيه
هذه الخطوة تساعد الخطوة الي بعدها انه يتم ترسيب عدد اكبر من ال DNA
الخطوة الخامسه والاخيره : elution
نستخدم elution buffer اسمه AE buffer
ويعتبر alkaline
وهدفها زي ماقلنا تزيد ترسيب الDNA 🧬💫
انتهى💫
نستخدم elution buffer اسمه AE buffer
ويعتبر alkaline
وهدفها زي ماقلنا تزيد ترسيب الDNA 🧬💫
انتهى💫
جاري تحميل الاقتراحات...