Western blot
تقنية مستخدمة في الكشف عن البروتينات. قد يحصل في أثناء إجراء التجربة التعرض لمشاكل عده منها: (1) ظهور (bands) باند غير عادية أو غير متوقعة ،(2) لا وجود للباند ،(3) باند باهت أو ضعيف، (4) خلفية ملطخه و (5) باند وبقع غير منتظمة أو غير متساوية👇🏻
تقنية مستخدمة في الكشف عن البروتينات. قد يحصل في أثناء إجراء التجربة التعرض لمشاكل عده منها: (1) ظهور (bands) باند غير عادية أو غير متوقعة ،(2) لا وجود للباند ،(3) باند باهت أو ضعيف، (4) خلفية ملطخه و (5) باند وبقع غير منتظمة أو غير متساوية👇🏻
هُنا راح أذكر عن تجربة شخصية بعض النقاط التي تساعد باذن الله في تفادى حدوث كل ماسبق ✨👍🏻
:
#مختبرات_طبية #علوم #Western #proteins
:
#مختبرات_طبية #علوم #Western #proteins
🔺لابد من أن تكن العينه المستخدمة جديده (fresh sample) وذلك بسبب حساسية البروتين للعوامل الخارجية.
🔺عند إستخلاص البروتين يُنصح باستخدام protease inhibitors-
phosphatase inhibitors for phospho-targets
🔺عند إستخلاص البروتين يُنصح باستخدام protease inhibitors-
phosphatase inhibitors for phospho-targets
🔺الحرص على أن يكون تحضير العينة داخل ثلج لتجنب تحلل البروتين
🔺الحرص على إستخدام high quality nitrocellulose membrane وذلك بسبب أن جودة بعض nitrocellulose membrane تكن غير مناسبة للبروتينات صغيرة الحجم
🔺الحرص على إستخدام high quality nitrocellulose membrane وذلك بسبب أن جودة بعض nitrocellulose membrane تكن غير مناسبة للبروتينات صغيرة الحجم
🔺عند خطوة transfer membrane أو نقل البروتين لفلتر بيبر يُفضل بأن يكن transfer buffer 10x محضر مسبقًا ومحفوظ في مكان بارد لتفادى التحلل اثناء عمل جهاز gel electrophoresis او بوضع قالب من الثلج أثناء تشغيل الجهاز ولكن على صعيد شخصي أفضل النقطة الاولى.
🔺لحجب البروتينات الغير مرغوبة يُفضل تحضير block solution باضافة 5% من الحليب قليل الدسم في PBS مع 0.1% من tween 20 ( للتخلص من الفائض من block solution او بدلًا عن ذلك البعض يستخدم BSA.
🔺يُفضل بعد إضافه blocker يُترك لمده ساعه في درجه حرارة الغرفه
🔺الحرص عن تجهيز التخفيف المناسب والدقيق من antibodies
🔺يُفضل بعد إضافة primary antibody أن يُترك لمدة يوم كامل في مكان بارد
🔺يُفضل بعد إضافة secondary antibody أن يُترك لمدة ساعه في درجه حرارة الغرفه
🔺الحرص عن تجهيز التخفيف المناسب والدقيق من antibodies
🔺يُفضل بعد إضافة primary antibody أن يُترك لمدة يوم كامل في مكان بارد
🔺يُفضل بعد إضافة secondary antibody أن يُترك لمدة ساعه في درجه حرارة الغرفه
🔺 عملية الغسيل بعد إضافه antibodies لا تقل عن ٣ مرات 🤚🏻 ولابد من إستخدام ماء معقم مفلتر
🔺To activation the nitrocellulose membrane
الطريقة اللي بتبعها هي تغطية membrane باستخدم نفس transfer buffer المسبق ذكره 👍🏻
الطريقة اللي بتبعها هي تغطية membrane باستخدم نفس transfer buffer المسبق ذكره 👍🏻
Western blot
Western blot
😅 Nothing impossible, all we gonna reach the good one
🔺Western Blot Troubleshooting Guide👇🏻
جاري تحميل الاقتراحات...