لماذا نقولم بعزل الفايروس و تنميته او استزراعه؟سلسلة تغريدات تتحدث عن هذا الموضوع مع شرح لاحدى طرق تنميته، من اسباب قيامنا بعزل الفايروس لانه لايستطيع ان يعيش الا داخل كائن حي او داخل خلايا حيه اذاً لماذا نقوم بذلك؟ للمساعدة في التشخيص، صناعة اللقاحات ،للتعرف عليه كيف؟(١)
نعمل له تسلسل جيني Sequence لكي نعرف مكوناته وحجمه والجينات اللي فيه ولكي اقوم بهذه العملية احتاج ان يكون الفايروس في قمة ضراوته وفكرتها انك تكرر عملية الاستزراع وتسمى Serial Passage، الان انا لدي طريقتين لاستزراع الفايروس او تنميته الاولى داخل الخلايا وتسمى cell culture (٢)
ويستخدم لذلك خلايا من القرود و تكون الخلايا Freash وتسمى primary cells وتستخلص الخلايا بواسطة الكشط او بواسطة انزيم يسمى تربسين او آخر يسمى كولاجيناز، وسنحتاج في هذه الطريقة الى فلاسك Flask وايضا الى liquid culture medium بالاضافه الى petri dish ومجهر ضوئي(٣)
والطريقة الثانية من الاستزراع هي اللي تكون داخل كائن حي ومنها اجنة البيض وهذه الطريقة طبقتها اكثر من مرة، بداية تحضر بيض غير محصن وتضعه في الحضانه لمدة ٩-١١ يوم وبعدها في يوم حقن الفايروس (اليوم ١٢) للاجنة ، تنظف البيض بمسحة طبيه مثلا او اي معقم المهم(٤)
ان يكون البيض معقم وراح اقسم البيض الى مجموعتين اذا بحقن فايروس واحد والى ثلاثة اذا عندي عترتينن مثلا من نفس الفايرس ( كل عترة في عضو يختلف عن الثاني)، الفكرة فيه مجموعة كنترول المفروض الجنين ينمو فيها طبيعي لما يجي وقت فتح البيض، واقارن بالتغيرات المرضية التي حدثت للجنين(٥)
اللي تم حقنه مقارنة مع الكنترول ،وعندنا اكثر من طريقة للحقن تعتمد على الفايروس اي كل مجموعة من الفايروسات ولها طريقة حقن مايعيش هذا الفايروس داخل الاجنة الا بواسطتها فمثلا لو انا بحقن بطريقة allantoic inoculation بحتاج دبوس مثلا وبعقمه وبفتح فتحه بسيطة من الجهة كما في الصورة (٦)
وبحتاج ابرة (نفس ابرة الانسولين) وبحتاج مضاد حيوي ومضاد فطريات ليه؟ لان الفكرة ان اللي ينمو الفايروس فقط وحتى أتأكد من عدم وجود بكتريا مثلا، وبضع من محلول الفايروس ٢٠٠ مايكرو ( اللي اكون انا مجهزه )ونقاط من المضاد الحيوي ومضاد الفطريات (٥ نقاط من كل نوع)بعد الحقن احتاج الى شمع(٧)
علشان نسكر الفتحة اللي عملنها اثناء الحقن
الان اتأكد من الحضانة انها تعمل وبعض انواعها يحتاج انك يوميا تشيك على الماي ، اثناء التحضين لكن هنا في مرحلة الحقن راح تجي يوميا لمدة٣ ايام وبتعمل شي اسمه candle وهو انك تكون في غرفة مظلمة ومعك لمبة وتشيك اذا الجنين حي والا لا(٨)
الان اتأكد من الحضانة انها تعمل وبعض انواعها يحتاج انك يوميا تشيك على الماي ، اثناء التحضين لكن هنا في مرحلة الحقن راح تجي يوميا لمدة٣ ايام وبتعمل شي اسمه candle وهو انك تكون في غرفة مظلمة ومعك لمبة وتشيك اذا الجنين حي والا لا(٨)
و اذا كان باللون الاحمر معناها حي والميت تستبعده الى اليوم الثالث تفتح كل البيض المحقون مع الكنترول (الصور ممكن تكون مزعجة ماراح اضعها) لكن بتشوف جنين مشوه اما تقزم او نقص في بعض الاطراف وهنا معناها الفايروس تم استزراعه بالشكل الصحيح طبعاً عدوك اللدود في هالعملية التلوث وشكراً(٩)
جاري تحميل الاقتراحات...