اشكر المبدعين على عمل الفيديو اللطيف هذا و اشكر استاذه مشاعل على مشاركاتها الرائعه
راح اتكلم من خبرتي عن خطوات استخلاص الحمض الوراثي DNA ولكن بتفصيل اكثر فا بسم الله الرحمن الرحيم نبداء
راح اتكلم من خبرتي عن خطوات استخلاص الحمض الوراثي DNA ولكن بتفصيل اكثر فا بسم الله الرحمن الرحيم نبداء
أول خطوه هي خطوه اذابه الجدر للخلايا ، طيييييب ليش جمعتها و ما قلت الجدار الخلوي ?? ؟؟
عشان اقدر اشمل في كلامي حتى عينات العظام
فلو الخليه رخوه و جدارها يحتوي على احماض دهنيه مثل استخلاص الDNAمن الخلايا الطلائيه او خلايه الدم البيضاء في الدم ضروري خطوه تكسير الخلايا انها
عشان اقدر اشمل في كلامي حتى عينات العظام
فلو الخليه رخوه و جدارها يحتوي على احماض دهنيه مثل استخلاص الDNAمن الخلايا الطلائيه او خلايه الدم البيضاء في الدم ضروري خطوه تكسير الخلايا انها
تحتوي على صابون !! ؟؟
كيف صابون ياراجل؟ ماده SDS صوديوم دودوسايل سلفيت تعمل على وضع شحنه على الجزء الغير قطبي في الغشاء الدهني فا تجعل منو مركب ذائب في الماء من هنا نقدر نكسر الجدر الخلويه ،
طبعا تركيزه يكون بين ١٠ الى ٤٠% و معاه ايثانول ٧٠% و ايزو بربانول
كيف صابون ياراجل؟ ماده SDS صوديوم دودوسايل سلفيت تعمل على وضع شحنه على الجزء الغير قطبي في الغشاء الدهني فا تجعل منو مركب ذائب في الماء من هنا نقدر نكسر الجدر الخلويه ،
طبعا تركيزه يكون بين ١٠ الى ٤٠% و معاه ايثانول ٧٠% و ايزو بربانول
لو العينه كانت دم بدون فصل كريات الدم الحمرا اما نعمل كذا مرحله للغسيل بالايثانول للتخلص من اللون الاحمر و البوتاسيوم او نضيف EDTA ليش المركب دا؟؟؟
و ليش نتخلص من البوتاسيوم في التغريده اللي بعدها اشرح لكم بس اسيبكم مع صوره توضيحيه لعمل SDS نسيت احطها اول
و ليش نتخلص من البوتاسيوم في التغريده اللي بعدها اشرح لكم بس اسيبكم مع صوره توضيحيه لعمل SDS نسيت احطها اول
كييييف مركب EDTA يخلصنا من البوتاسيوم او الايونات الموجبه شرحتها في دقيقه ١٣ في المقطع دا بالتفصيل بقناتي باليوتيوب
بالله لايك سبسكرايب و كدا لا تبخلو عليا ?
youtu.be
المهم لازم نعرف انو وجود البوتاسيوم وهو ايون موجب و اكثر قابليه للارتباط من المغانيسيوم
بالله لايك سبسكرايب و كدا لا تبخلو عليا ?
youtu.be
المهم لازم نعرف انو وجود البوتاسيوم وهو ايون موجب و اكثر قابليه للارتباط من المغانيسيوم
و هو اللي ينشط عمل انزيم البلوميرايز في خطوه PCR فا لو ارتبط البوتاسيوم في العينه راح يضرب علينا الانزيم عشان كدا لازم نتخلص منو بغسيل العينه كويس قبل الفصل النهائي
ودي صوره توضح عمل EDTA
ودي صوره توضح عمل EDTA
نكمل طبعا بعد الدهون ايش نسوي لازم نرسب ونفكك البروتينات واهمها الهستونات اللي مبروم عليها شريط ال DNA في كيف نسوي ؟ ??
بكل بساطه نعمل دنتره للبروتين واسهل طريقه اما الحراره يصير زي البيض يتجمد و ممكن فصله بسهوله او الافضل نحط ملح NaCl بتركيز عاااااالي ٦ مولار و اكثر و نتفرج
بكل بساطه نعمل دنتره للبروتين واسهل طريقه اما الحراره يصير زي البيض يتجمد و ممكن فصله بسهوله او الافضل نحط ملح NaCl بتركيز عاااااالي ٦ مولار و اكثر و نتفرج
عالمنظر الجميل كيف البروتينات تطيح قدامنا في الانبوب طبعا دي حا تكون بواقي اي بروتين ذائب في الخلايا ما راحت مع البروبانول و الايثانول قبل كدا و نضيف bufferعشان نحط انزيم proteinase k
و نحطو في درجه حراره مناسبه له ٦٥ درجه عشان يقعد يفكك البرواتينات الباقيه واهمها الهستونات
و نحطو في درجه حراره مناسبه له ٦٥ درجه عشان يقعد يفكك البرواتينات الباقيه واهمها الهستونات
الخطوه اللي فاتت كانت تتكلم عن FABG Buffer اللي ذكرت في المقطع اول الثريد و بالنسبه للخلايا الصلبه مثل العظام او الخلايا النباتيه اللي تحتوي على جدار سيليلوزي ضروري نكسرها كويس عشان نقدر نطلع مكوانتها و التكسير اما يكون يدوي بالمهراس morter او الافضل يكون بالسونيكيتر جهاز تكسير
بالموجات الصوتيه و بعدين نمشي على الخطوات زاتها اللي زكرتها غبل كدا على قوله احبابنا اهل السودان ??
بعد التحضين واللي يكون في الكتات حوالي نص ساعه عشان نكسر البروتينات و في الاستخلاص اليدوي ٣ ساعات او اكثر و كل ما زادت مده التحضين اشوف انو اضمن و افضل
بعد التحضين واللي يكون في الكتات حوالي نص ساعه عشان نكسر البروتينات و في الاستخلاص اليدوي ٣ ساعات او اكثر و كل ما زادت مده التحضين اشوف انو اضمن و افضل
طبعا انا اتكلم عن تجربه فصل ال DNA بي طريقه الترسيب بالايثانول و هي تعتبر اسهل و ادق من تجربه الكلورو فورم و و اقل خطوره و طريقه المغناطيس اللي راح اتكلم فيها مستقبلا ان شاء الله
طيب ايش بعد كدا ؟؟؟؟؟
نضيف ايثانول ٧٠% نعمل طرد مركزي على سرعه متوسطه و بعدين نتخلص من الرائق ونعيدها مع ايثانول مركز و بسرعه طرد مركزي عاليه ١٤٠٠٠ تقريبا و هذه تمسى خطوه الترسيب بالايثانول و كذلك تعتبر خطوه الغسيل الأخيره. بس يا ترا ايش يصير فيها ؟؟؟ ?♂️??
نضيف ايثانول ٧٠% نعمل طرد مركزي على سرعه متوسطه و بعدين نتخلص من الرائق ونعيدها مع ايثانول مركز و بسرعه طرد مركزي عاليه ١٤٠٠٠ تقريبا و هذه تمسى خطوه الترسيب بالايثانول و كذلك تعتبر خطوه الغسيل الأخيره. بس يا ترا ايش يصير فيها ؟؟؟ ?♂️??
كلنا نعرف تركيب الايثانول اللي يحتوي في طرفوا مجموعه هيدروكسيل OHو اللي بمجرد تذويبو في ماء نخسر الهيدروجين و كدا يفضل ايون الاكسجين بشحنتوا السالبه يدون صاحبو هيدروجين ?
و في نفس الوقت في شحنه سالبه ثانيه في مجموعهوالفوسفات اللي تغلف ال DNAمن بره فا يتنافروا و كده تتكون كتله
و في نفس الوقت في شحنه سالبه ثانيه في مجموعهوالفوسفات اللي تغلف ال DNAمن بره فا يتنافروا و كده تتكون كتله
مع الطرد المركزي نستفيد من الايثانول كا مذيب عضوي يخلصنا من باقي شوائب الخلايا كمان شحنتو السالبه تتنافر مع الDNAفا تكرمشوا وقت الطرد المركزي و تدفوه ?? بقوه تحشروا في ركن الانبوبه و تتكون عندنا كتله الحمض الوراثي في طرف الانبوب واضحه لو كانت العينه غنيه بيه زي الاغشيه
كدا وصلنا لمرحله انو الحمض الوراثي مستقر ولاصق في طرف الانبوبه و ممكن حفظو بحالتو دي مع الايثانول بدون اي قلق انو العينه تخرب
و لمن نبا نشتغل عليه نبخر الايثانول او نقلبةالانبوبه فوق منديل نشاف عشان يسحب الايثانول و نضيف محلول ملحي متعادل الشحنه عشان يتفكك و يرجع لحالتو الطبيعيه
و لمن نبا نشتغل عليه نبخر الايثانول او نقلبةالانبوبه فوق منديل نشاف عشان يسحب الايثانول و نضيف محلول ملحي متعادل الشحنه عشان يتفكك و يرجع لحالتو الطبيعيه
و دي خطوه اضافه Elution buffer بحيث انو شريط ال DNAيرجع يتخلص من الشحنه السالبه اللي كسبها من الايثانول وكرمشتوا في جدار الانبوب ويرجع يتفنس و ينفرد براحتوا و كدا يكون عندنا #تجربه استخلاص DNA بشكل مفصل اتمنى انها تكون افادتكم
جاري تحميل الاقتراحات...