اصدقائي الجميلين في تويتر
بحسب التصويت اللي نزلته قبل يومين تم اختيار موضوع الثريد لليوم وهو تقنيات شائعة الاستخدام في مراكز الابحاث @SA_Microbiology @kokofaris_ @ghayda_basfar @basimbyg2 @Manal_Monshi @Biology1802 @mole_biology @AfghaniHani @Qualitymatters9
بحسب التصويت اللي نزلته قبل يومين تم اختيار موضوع الثريد لليوم وهو تقنيات شائعة الاستخدام في مراكز الابحاث @SA_Microbiology @kokofaris_ @ghayda_basfar @basimbyg2 @Manal_Monshi @Biology1802 @mole_biology @AfghaniHani @Qualitymatters9
طبعا المعلومات حتكون شئ من خبرتي فتره دراستي للماجستير في كندا و معلومات استقيتها من ورقة علميه موثوقة ..
خلونا نبعد شويه عن الاحداث الحالية و نغير المواضيع فخلوكم قريبين ??
خلونا نبعد شويه عن الاحداث الحالية و نغير المواضيع فخلوكم قريبين ??
اي باحث مبتدئ او متمرس ???لما يقرأ الاوراق العلمية المنشوره اثناء بحثه حيلاحظ انو في عدد من التقنيات بتتكرر في اكتر من بحث اذا ما كان اغلبها راح اسرد بعض التقنيات كأمثله و حافصل في تقنيه مهمة اسمها Western blot
طبعا حابدأ بروح المختبر و هي cell culture او زراعة الخلايا مافي مختبر ابحاث ما يحتاجها جدا مهمة سواء في دراسات In vitro او In vivo ?
و هادي صوره لمزارع الخلايا
و هادي صوره لمزارع الخلايا
فائدة زراعة الخلايا انها تساعد علي زيادة تكاثر الخلايا اللي نبغا ندرسها او ممكن نعملها تخصيص لانواع تانيه من الخلايا ازا كنا بنزرع خلايا جذعيه و لكل نوع خليه لها بيئة معينه تتكاثر فيها
البيئات عاده نقدر نشتريها جاهزه من شركات متخصصه او ممكن تتحضر في المختبر، و طبعا الخلايا دي بعد ما ننميها نقدر نعالجها او نجمعها و نبدأ نسوي التجارب عليها.
تاني تقنية عندنا PCR طبعا هادا مهم جدا في معظم المختبرات خاصة المختبرات المختصة بالدراسات الجزيئية و الجينية و ماراح اتكلم فيها لانها تقنيه اشهر من علم ما تحتاج
تقنية Flow cytometry تقنية مهمة جدا في الابحاث الجزيئية و احيانا بعض المختبرات تستخدمها علشان يتأكدوا من دقة عزل الخلايا المطلوبه المستخرجه من حيوانات التجارب .
طيب نجي للتقنيه الرهيبه اللي اغلب مختبرات الابحاث ما تستغنى عنها وهي Wester blot ??
* مبدأ عمل western blot :
انو يقدر يطلع لك البروتين اللي انت تبغاه عن طريق الفصل الكهربائي. اعتمادا علي الوزن الجزيئي للبروتين.
* مبدأ عمل western blot :
انو يقدر يطلع لك البروتين اللي انت تبغاه عن طريق الفصل الكهربائي. اعتمادا علي الوزن الجزيئي للبروتين.
* فائدتها :
جدا مهمة في الدراسات الجزيئية خاصة اللي تتعلق بوظائف البروتينات و دورها مثلا في السرطانات او غيرها
جدا مهمة في الدراسات الجزيئية خاصة اللي تتعلق بوظائف البروتينات و دورها مثلا في السرطانات او غيرها
* طريقة عملها:
Western blot هي من التجارب الطويله نوعا ما غالبا تاخد يومين
يمر ب ٣ مراحل
١/ فصل الجزيئات
٢/ نقل الجزيئات المفصوله الى وسط صلب
٣/ الكشف عن البروتين المطلوب بواسطه Ab
Western blot هي من التجارب الطويله نوعا ما غالبا تاخد يومين
يمر ب ٣ مراحل
١/ فصل الجزيئات
٢/ نقل الجزيئات المفصوله الى وسط صلب
٣/ الكشف عن البروتين المطلوب بواسطه Ab
حنستخرج البروتينات من الخلايا بعد تكسيرها و نمررها على جهاز الفصل الكهربائي علشان نفصل البروتينات علي الجل حسب وزنها الجزيئي ..
عملية الفصل ممكن تاخد من ساعه الى ٦ ساعات او اكتر حسب البروتين ازا كان وزن البروتين كبير ممكن ياخد ساعه بس لو كان حجمه صغير حياخد وقت اطول
طيب فصلنا الجزيئات ايش حنسوي بعدها البروتينات مفصوله على جل على شكل band و صعب القياس عليها
اذا راح ننقل البروتينات المفصوله علي membran علشان يسهل علينا قياس كثافة البروتين العملية هادي غالبا تاخد وقت اقصر من مرحله الفصل
اذا راح ننقل البروتينات المفصوله علي membran علشان يسهل علينا قياس كثافة البروتين العملية هادي غالبا تاخد وقت اقصر من مرحله الفصل
طيب خلاص نقلنا البروتينات ل membrane الان وصلنا لخطوه جدا مهمه اللي هي غسل membrane بمحلول خاص علشان نزيل اي شوائب و هادي صوره membrane
حنعمل block للممبران ايش فايده الخطوة دي ؟
فائدتها انها تمنع nonspecific Ab في الخطوة التالية انها تمسك في الميمبران علشان لا تخرب عليا قراءه النتائج
فائدتها انها تمنع nonspecific Ab في الخطوة التالية انها تمسك في الميمبران علشان لا تخرب عليا قراءه النتائج
طيب غسلنا الممبران و عملنالها بلوك حنحضنها في محلول فيلو primary Ab تمسك في البروتين اللي احنا نبغاه و نسيبه ليله بكاملها تاني يوم نجي نغسل الميمبران علشان نزيل unbound primary Ab
و نحضنها في secondary Ab تكون labeled علشان حتتحمض على فلم و الفلم دا هو اللي حنقرا منه النتائج
و نحضنها في secondary Ab تكون labeled علشان حتتحمض على فلم و الفلم دا هو اللي حنقرا منه النتائج
صوره الفلم اللي حنقرا عليه النتائج
هدا اهم نقاط عمليه الوسترن بلوت التقنيه فيها كتير تفاصيل بس ما اتكلمت فيها
قراءة النتائج تكون بحساب كثافة الباند اللي طلعلنا عالفلم و نحولها ببرامج معينه لارقام علشان نقدر نمثلها في رسم بياني . في الصوره اعلى اليسار صوره الويسترن بلوت و الرسوم البيانية تمثيل لها
قراءة النتائج تكون بحساب كثافة الباند اللي طلعلنا عالفلم و نحولها ببرامج معينه لارقام علشان نقدر نمثلها في رسم بياني . في الصوره اعلى اليسار صوره الويسترن بلوت و الرسوم البيانية تمثيل لها
زمان كان الوسترن بلون يعتبر التشخيص التأكيدي لمرض نقص المناعه المكتسبة بس بعدين جا PCR و استولى عالمكانه هادي
حاليا ما نشوف جهاز الويسترن بلوك في المختبرات التشخيصية الى حد علمي و عمري ما شفتهافي مختبرات المستشفيات و لكنها موجوده ١٠٠٪ في اغلب مختبرات الابحاث ازا ما كان كلها
حاليا ما نشوف جهاز الويسترن بلوك في المختبرات التشخيصية الى حد علمي و عمري ما شفتهافي مختبرات المستشفيات و لكنها موجوده ١٠٠٪ في اغلب مختبرات الابحاث ازا ما كان كلها
من الاستخدامات التانيه للتقنيه انو ممكن نشوف
How pure our cell isolation method
باننا نكشف عن البروتينات المهمة لكل نوع من الخلايا او الجزيئات مثل TSG101 protein for exosome isolation
How pure our cell isolation method
باننا نكشف عن البروتينات المهمة لكل نوع من الخلايا او الجزيئات مثل TSG101 protein for exosome isolation
امثلة علي good weatern blot bands الارقام اللي عالجنب هادي دلاله على الوزن الجزيئي للبروتين و هادي مهمة علشان نعرف مكان البروتين اللي احنا نبغاه
امثلة على bad western blot bands و تقدرو تشوفو انو صعب نحدد البروتين اللي احنا نبغاه ففي الحاله دي نضطر نعيد التجربة مرة تانية
فيديو توضيحي لخطوات التجربة من الشركة الرائدة في هادا المجال bio-rad m.youtube.com
و هنا رابط للورقة العلمية اللي اعتمدتها كمصدر للثريد للي حابب يعرف تفاصيل اكتر عن التقنية و بلغة انجليزيه مبسطة حتفيد المبتدئين ncbi.nlm.nih.gov
بكدا وصلنا لنهاية الثريد ان شاء الله اكون قدرت اوصل المعلومه بابسط شكل ممكن و ان ذكرت معلومة خاطئة اتقبل كافة الانتقادات للتطوير . ???
جاري تحميل الاقتراحات...